牛的凍精改良技術(shù)是目前使用多、有效的一種繁殖技術(shù)，凍精的正確保存及使用，是保證牛正常受胎的前提之一，在貯存和使用牛凍精時(shí)應(yīng)注意，下面是利用成都金鳳液氮罐儲存的過程和注意事項(xiàng)

MVE液氮罐儲存牛凍精保存過程：

稀釋后的精液，采用逐漸降溫法。在1—1.5h內(nèi)，使稀釋精液的溫度降到4—5℃;然后再在同溫的恒溫容器內(nèi)平衡2—4h。平衡、封裝后的細(xì)管精液上架碼放是應(yīng)注意細(xì)管擺放方向，把棉塞封口端靠近操作者，超聲波封口端遠(yuǎn)離操作者，入冷凍儀時(shí)亦應(yīng)如此放置。每架上放上根類似于細(xì)管的標(biāo)記物，一頭牛用同一顏色的標(biāo)記物，便于識別。如同一架上有不同牛的細(xì)管精液，要分開碼放，兩頭牛之間要隔開一些距離，以免混淆。

MVE液氮罐儲存牛凍精的過程及注意事項(xiàng)

冷凍儀是全自動(dòng)冷凍研磨機(jī)。冷凍儀與低溫柜應(yīng)盡量靠近，開啟液氮罐閥門把冷凍儀降溫4℃，關(guān)閉風(fēng)扇電源，待風(fēng)扇*停止后把已排滿待凍細(xì)管的架子迅速放入冷凍儀，蓋嚴(yán)蓋子按電腦預(yù)先設(shè)定好的冷凍曲線程序自動(dòng)完成冷凍過程。如果凍精細(xì)管數(shù)量不足時(shí)，要填充備用塑料管和細(xì)管架以保持冷凍曲線程序自動(dòng)完成冷凍過程，確保凍精質(zhì)量。

精液冷凍過程中要求溫度必須直線下降，不得回升。特別是不得進(jìn)入精子冷凍-15—-50℃的危險(xiǎn)溫區(qū)，使精細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)冰晶而造成精子死亡。

當(dāng)細(xì)管溫度降至-144℃時(shí)，打開冷凍儀蓋子，將凍制好的細(xì)管凍精取出快速以25支包裝單位裝入特制的塑料拇指管內(nèi)，迅速浸入液氮中待檢。

解凍后在37℃環(huán)境下前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子占總精子數(shù)的百分率為精子活力。牛冷凍精液的前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)是評價(jià)凍精產(chǎn)品質(zhì)量的一項(xiàng)重要指標(biāo)之一。該項(xiàng)指標(biāo)不僅與受胎率有關(guān)，而且關(guān)系到凍精產(chǎn)量及種公牛遺傳資源的利用率。因此有效精子數(shù)要達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)(GB4143-2008)每劑前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)>1500萬個(gè)。

解凍溫度如同精液冷凍一樣，冷凍精液在融解過程中同樣也要順利通過危險(xiǎn)區(qū)，不會對精子造成冰晶損傷，目前常用解凍溫度為38℃左右，解凍10s即可。用紙將解凍后的精液細(xì)管擦干，將精液滴在載玻片上進(jìn)行鏡檢，經(jīng)檢查合格的入庫保存，不合格的廢棄。解凍后精液活力應(yīng)保持在35%以上。

用液氮罐儲存牛凍精的注意事項(xiàng)：

1、牛凍精應(yīng)貯存于液氮罐的液氮中，設(shè)專人保管，每周定時(shí)加一次液氮，并經(jīng)常檢查液氮罐的狀況。

如發(fā)現(xiàn)液氮罐外殼結(jié)霜，應(yīng)立即將凍精轉(zhuǎn)移入其它液氮罐內(nèi)保存，包裝好的凍精由一個(gè)液氮罐轉(zhuǎn)換到另一個(gè)液氮罐時(shí)，在液氮罐外停留的時(shí)間不得超過3秒，取存凍精后要蓋好液氮罐罐塞，在取放蓋塞時(shí)，要垂直輕拿輕放，不得用力過猛，防止液氮罐罐塞折斷或損壞，移動(dòng)液氮罐時(shí)，不得在地上拖行，應(yīng)提起手柄抬起罐體后再移動(dòng)。每頭公牛的凍精應(yīng)單獨(dú)貯存,貯存凍精的容器每年至少清洗一次并更換新鮮液氮。

2、使用冷凍精液時(shí)，應(yīng)注意公牛的品種、名號及批號、作好記錄。

MVE液氮罐儲存牛凍精的過程及注意事項(xiàng)

由液氮罐提取精液，精液在液氮罐頸部停留不應(yīng)超過10秒，儲精瓶停留部位應(yīng)在距頸管部8cm以下;顆粒精液在2.9%檸檬酸鈉液1～2mL中，水浴加溫在(40±0.2)℃解凍;細(xì)管精液直接投放在(40±0.2)℃溫水中解凍;精液鏡檢在38～40℃的溫度下進(jìn)行，精子活率不應(yīng)低于30%，每劑量直線運(yùn)動(dòng)精子數(shù)顆粒精液在1200萬個(gè)以上，細(xì)管精液在1000萬個(gè)以上，符合這些標(biāo)準(zhǔn)的精子才可用于輸精。

3、牛冷凍精液現(xiàn)在多用0.25毫升微型細(xì)管包裝。用于人工授精的冷凍精液應(yīng)來源于系譜齊全、經(jīng)后裔測定的公牛的精液，而不能因?yàn)閮r(jià)廉選用質(zhì)量差的公牛精液。

冷凍精液解凍后，精子活力不低于0.35，精子復(fù)蘇率不低于50%，每一劑量直線前進(jìn)的精子數(shù)不低于1000萬個(gè)，精子畸型率不高于20%，精子頂體完整率不低于40%，無病原微生物。購買的冷凍精液要在液氮罐中妥善保存，特別要經(jīng)常查看液氮面，及時(shí)補(bǔ)充液氮。

液氮罐儲存牛凍精的過程及注意事項(xiàng)

液氮罐中轉(zhuǎn)移冷凍精液注意事項(xiàng)：

從液氮罐中轉(zhuǎn)移冷凍精液，或者運(yùn)送冷凍精液時(shí)要應(yīng)小心，減少精液在室溫狀態(tài)下的時(shí)間，做好不超過幾秒鐘，因此，用于運(yùn)輸和儲存容器應(yīng)并排放置，始終保持在液氮罐霜線下面，而定位，識別和抓取吸管時(shí)，用一個(gè)預(yù)冷的止血鉗或鑷子和轉(zhuǎn)移，將吸管一個(gè)接一個(gè)地快速送到液氮罐。

小心不要將吸管掉進(jìn)罐底部，因?yàn)樗鼈冊谶@個(gè)溫度下非常脆，很容易破裂。降低將吸管慢慢地放入罐中然后再加入罐中，重復(fù)這個(gè)過程，直到所有的吸管都裝滿了。